【偏振荧光光度法】 荧光分光度法原理

是在荧光计上附加互相垂直的偏振片消除溶剂散射光的影响和干扰物的干扰,并附加滤光片提高选择性。酪酪氨酸、色氨酸和苯丙氨酸是天然氨基酸中仅有的能发荧光的3 种氨基酸,有人认为在荧光计上附加互相垂直的偏振片可以消除苯丙氨酸的干扰和溶剂散射光的影响,再附加滤光片进一步提高酪氨酸和色氨酸荧光测定的选择性。有人对17 种复合结晶氨基酸注射液进行含量测定,吸取不同量的酪氨酸、色氨酸标准溶液,在LS25 型荧光分光光度计上附加偏振附片,再附加280P310nm 滤光片,在307nm 测定酪氨酸偏振荧光强度; 附加280P375nm 滤光片,在372nm 测定色氨酸偏振荧光强度,分别绘制酪氨酸、色氨酸的标准曲线。酪氨酸线性范围为0. 02~1120mgPL ,回归方程为: F = 3100 C +1173 , r = 0. 999 ;色氨酸线性范围为0101~2150mgPL ,回归方程为: F = 1.  95 C  + 0. 772 , r = 01999。用同样的方法分别测定17 种复合结晶氨基酸注射液中酪氨酸、色氨酸偏振荧光强度,利用各自的标准曲线,计算出注射液中酪氨酸、色氨酸含量。本法采用物理手段改善选择性较化学法更为简便,能有效消除酪氨酸对色氨酸测定的干扰,可同时测定17 种氨基酸注射液中酪氨酸、色氨酸含量。与氨基酸分析仪测定结果对照,结果一致。